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        呼吸道合胞病毒 IgM ELISA試劑盒說明書
        呼吸道合胞病毒 IgM ELISA試劑盒說明書
        (德國IBL:RE56891)
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        1、實驗原理
        此酶免試劑盒可用于人血清中抗RSV(呼吸道合胞病毒)IgM抗體的體外定性和定量檢測。
        2、前言說明
        在患有細支氣管炎或肺炎的六個月大的嬰兒中,可發(fā)現(xiàn)呼吸道RSV感染和特定的臨床癥狀之間有明顯的。在年齡稍大 的嬰兒和小兒中,感染癥狀會溫和一些。 25%以上的RSV呼吸道感染都是可被察覺的。由于RSV再次感染的可能性,人們認為這些再次感染的抗體與成年人中這些疾病的緩慢發(fā)展過程(類似于感冒) 有關。然而,特別是早年,血清抗體并不能成為抗呼吸道感染的有效保護。因此,這種病原體可能會引起細支氣管炎或引起四歲大的嬰兒患肺炎?;诤粑篮习?毒抗原的關系,我們可以將呼吸道合胞病毒分為兩大類(A和B)。病毒的表面糖蛋白(G糖蛋白和融合糖蛋白)可產(chǎn)生病毒抑制抗體。RSV的A和B類病毒的G 糖蛋白與F糖蛋白相比明顯不同。用于RSV血清學診斷的補體結合實驗,其結果不是很理想。用于RSV感染的血清學診斷的酶免檢測具有很高的診斷價值,因為 酶免檢測靈敏度很高,并且可區(qū)分不同抗原的免疫球蛋白。在RSV感染中,IgM抗體反應可能不會出現(xiàn)或很弱,以至于不能獲得可靠的實驗結果。在一急性感染 中,因為IgA抗體可能會持續(xù)幾個月或幾年,所以單一樣品中的IgG抗體檢測并不明顯。被推薦為急性RSV感染血清學檢測方法是檢測血清中的IgG抗體 (雙份,要求其濃度明顯提高了)。
        3、實驗原理
        此固相ELISA試劑盒利用的夾心法原理。包被板上包被了抗原。用對人IgM具有特異性的酶標二抗來檢測結合到包被抗原的樣品特異性抗體。底物反應后,所顯示的顏色強度與檢測到的IgM特異性抗體的量成正比。樣品的結果可直接使用標準曲線得。
        4、試劑盒組成:
        4×2ml
        標準品A-D
        1;10;50;150U/mL,待用
        標準品A=陰性質控           標準品B=臨界質控
        標準品C=弱陽性質控         標準品D=陽性質控
        內含抗RSV的IgM抗體,PBS(磷酸緩沖液),穩(wěn)定劑。
        1×14ml
        酶標IgM
        紅色,待用。內含過氧酶標記的抗人IgM,蛋白緩沖液,穩(wěn)定劑。
        1×12×8
        包被板
        可拆,包被有特異性抗原。
        1×14ml
        TMB底物液
        含TMB
        1×14ml
        TMB終止液
        0.5M的H2SO4
        1×60ml
        稀釋液
        含PBS緩沖液,<0.1%NaN3
        1×60ml
        濃縮洗滌液
        濃縮型(10×),含PBS緩沖液,吐溫20
        粘性金屬板
        用于在溫育時遮蓋包被板
        塑料袋
        用于儲存不用的板條
         
        5、實驗所需材料但試劑盒不提供
        1)        RF吸附劑
        2)        移液器,體積:5;50;100;500 µL
        3)        校準儀
        4)        樣品稀釋用試管(1ml)
        5)        帶試劑儲器8道移液器
        6)        洗滌瓶,自動或半自動洗板機
        7)        能在450nm處讀數(shù)的酶標儀
        8)        雙蒸水或去離子水
        9)        吸水紙,取樣吸頭和計時器
        6、實驗前的準備說明
        6.1成分準備
        稀釋/溶解
        成分
         
        稀釋液
        比例
        備注
        貯存
        穩(wěn)定性
        60ml
        洗滌液
        加600ml
        雙蒸水
        1:10
        加熱至37°C以溶解
        結晶,充分混合
        2-8°C
         
        8周
        6.2樣品稀釋
        樣品
        稀釋
        稀釋液
        比例
        備注
        血清/血漿
        全部稀釋
        稀釋緩沖液
        1:101
        例:5µL+500µL
        樣品中IgM濃度高于zui高標準品的應當進一步稀釋。
        6.3用RF吸附劑處理:
        注意
        為了避免特異性IgG和類風濕因子的干擾,病人的血清應當用RF吸附劑處理(RE59059)。
        標準品和質控品千萬不要用RF吸附劑處理。
        1.
        在400µL按1:101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。
        2.
        室溫(18-25℃)下溫育≥1min(﹤15min)
        為了避免吸附特異性抗體,應當避免溫育時間﹥15min。
        預處理的樣品可能會是渾濁的。
        7、實驗步驟:
        1)        加100µL標準品和已稀釋樣本于相應反應孔中,在定性檢測中只使用標準品B。
        2)        封板后室溫(18℃-25℃)溫育60分鐘。
        3)        移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。
        4)        在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。
        5)        封板后室溫(18℃-25℃)溫育30分鐘。
        6)        移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時,如果有條件的話,可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。
        7)        每孔加TMB底物液100µL。
        8)        室溫(18℃-25℃)避光溫育20分鐘。
        9)        在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應。輕輕搖動包被板以使試劑混合均勻。此時,顏色藍色變成黃色。
        10)     加終止液后60分鐘內在450nm處測OD值。
        8、結果計算
        在半對數(shù)坐標紙上或用自動生成的方法,以標準品的OD值為Y軸,濃度為X軸,繪制一標準曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對 數(shù)圖或對數(shù)-對數(shù)圖都可獲得良好的實驗結果。對于標準曲線圖,用標準品的每一單值進行計算(樣品結果明顯異常的值必須刪除掉,應使用更加合理的單值)。樣 品的濃度可直接從標準曲線上獲得。一旦樣品稀釋了,就應當乘以相應的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于zui高標準,則應根據(jù)實驗前的準備說明所述對樣品進 行稀釋,并重新檢測。
        9、結果判定: >12 U/ml  為陽性,8 - 12 U/ml  為可疑,< 8 U/ml  為陰性
        此檢測結果并不是任何治療結果判定的*因素,它應當結合臨床觀察和診斷結果加以判斷。
        本譯文僅供參考,詳情請以原文為準。
         
         
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